薄板層析(Thin Layer Chromatography)

illff

如題，小弟有個疑問，假設我們要拿通過Thin Layer Chromatography來解析氨基酸(Amino acid)，由于氨基酸分成幾類，即polar，non-polar，acidic，basic，neutral。如果用不同的solvent（polar，non-polar，acidic，basic）來進行，會有怎么樣的結果？
比如說在polar的solvent，polar amino acid 會在較低的位置(near the origin)還是較高的位置(near the solvent front)？為什么？
至于acidic的solvent，acidic/basic/neutral的amino acid又會被解析到較高還是較低的位置？
我嘗試上網找了資料，但是還是一頭霧水，請問各位高手是否能夠建議幾個是有比較詳細的Thin Layer Chromatography的資料的網站？謝謝。

hihi23

TLC Plate 一般上都是铺上一层 silica（polar) 的. 其实，a.a. (amino acid) 不管是polar,nonpolar,acidic, basic, neutral 在做TLC的话都是归类于Polar molecule. 这是因为a.a. 本身有 free NH2 group and free COOH group. 根据经验，就算你用100% methanol 去 run TLC, a.a. 都不动。这是因为，a.a. and silica both are polar molecule, thus, have strong interation with each others.
基本上, 在做TLC的话，polar molecule 跑得比较慢(near origin)，nonpolar molecule 跑得比较快(near solvent front). 如果用polar solvent run,所有的点都会跑得比较快（高），如果用non-polar solvent run,所有的点都会跑得比较慢（低）。
其实这都是因为，TLC Plate 上都是铺了一层polar 的 silica.

illff

TLC Plate 一般上都是铺上一层 silica（polar) 的. 其实，a.a. (amino acid) 不管是polar,nonpolar,acidic, ...
hihi23 发表于 3-3-2010 10:46 AM

所以這就是為什么很多時候都要加其他solvent是嗎？
比如說50%water:50%isopropanol

hihi23

据我所知，很少人会用水来跑TLC。虽然水是很polar的solvent,但是他自己本身的附着性太强，会影响resolution. 所以，一般上跑TLC的solvent 最polar 的也是去到methanol 罢了。Never use water as solvent/eluant.

hihi23

话说回来，真的有人可以用TLC来跑a.a. 的sample 吗？根据我的经验，不管是什么a.a. 只要 free amine group and free carboxyl group 没被 protected. 那么不管eluant/solvent 用什么也好，它也爬不上去（still at the origin, Rf value=0)。

illff

其實我也不清楚，這只是我從別人的講義上看到的問題。
還有一題需要請教。
Which of the following would migrate further on TLC cellulose plate developed with CHCL3:Butanol:Water=4:3:3? Why?
(a)Lysine or Leucine
(b)Glutamate or Phenylalanine
既然它們在TLC都算是polar，那么這題應該怎樣解釋哦？
不好意思再次麻煩你了~

ejtk@u.p

其實我也不清楚，這只是我從別人的講義上看到的問題。
還有一題需要請教。
Which of the following would ...
illff 发表于 3-3-2010 11:36 AM

我不懂答案啦。。。可是我觉得这题是theory题，测试你对那三个Solvent的polarity的认识，及分析那些amino acids的structure 怎样影响他的polarity.... practically, 这未必能让它们在TLC plate上移动。。。